28°C താപനിലയിൽ 25 ദിവസത്തെ സ്റ്റാറ്റിക് ഇൻകുബേഷനുശേഷം, *Pleurotus ostreatus* NRC620 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസ് ഫംഗസ് കൾച്ചർ മീഡിയത്തിൽ ഏറ്റവും ഉയർന്ന പ്രവർത്തനം കാണിച്ചു. ഈ എൻസൈമിന് അനുയോജ്യമായ pH ഉം താപനിലയും യഥാക്രമം 3.0 ഉം 70°C ഉം ആയിരുന്നു. 40°C ലും 50°C ലും 2 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേഷനുശേഷം, എൻസൈം പ്രവർത്തനം യഥാക്രമം 68.33% ഉം 59.61% ഉം നിലനിർത്തി. സിട്രേറ്റ്-ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫറിൽ (pH 7.0) 2 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേഷനുശേഷം, എൻസൈം പ്രവർത്തനം 100% ആയി തുടർന്നു. 10 mM MgSO₄, CuSO₄ എന്നിവയുടെ കൂട്ടിച്ചേർക്കൽ എൻസൈം പ്രവർത്തനം യഥാക്രമം ഏകദേശം 21% ഉം 35% ഉം വർദ്ധിപ്പിച്ചു, അതേസമയം NaCl, MnCl₂, KCl, CaCl₂ എന്നിവ എൻസൈം പ്രവർത്തനത്തെ തടഞ്ഞു. ABTS ഒരു സബ്സ്ട്രേറ്റായി ഉപയോഗിച്ചപ്പോൾ, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ലാക്കേസിന്റെ ഗതികോർജ്ജ പാരാമീറ്ററുകൾ (Km ഉം Vmax ഉം) യഥാക്രമം 1.99 mM ഉം 16,217 μmol min−1 L−1 ഉം ആയിരുന്നു. ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് സാമ്പിളുകളുടെ എൻസൈമാറ്റിക് ചികിത്സ pH ഉം വിസ്കോസിറ്റിയും ഗണ്യമായി കുറച്ചു, ഈ കുറവ് സംഭരണ സമയത്തിലെ വർദ്ധനവുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. ലാക്കേസ് ചികിത്സ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ മൊത്തം ഫിനോളിക് ഉള്ളടക്കത്തിൽ നേരിയ കുറവുണ്ടാക്കി, പക്ഷേ ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനത്തിൽ ഒരു കുറവും ഉണ്ടായില്ല.
സമീപ വർഷങ്ങളിൽ, ഭക്ഷ്യ വ്യവസായത്തിൽ ഹരിത ബയോടെക്നോളജിയുടെ പ്രയോഗത്തിൽ ഗവേഷകർ ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിച്ചിട്ടുണ്ട്. ഭക്ഷ്യ വ്യവസായത്തിലെ ഏറ്റവും ഉപയോഗപ്രദമായ എൻസൈമുകളിൽ ഒന്നാണ് ലാക്കേസ്, ജ്യൂസ് സംസ്കരണം, ബേക്കിംഗ്, വൈൻ സ്ഥിരത, ഭക്ഷ്യ ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ ഓർഗാനോലെപ്റ്റിക് ഗുണങ്ങൾ മെച്ചപ്പെടുത്തൽ തുടങ്ങിയ മേഖലകളിൽ ഇത് പ്രയോഗങ്ങൾ കണ്ടെത്തുന്നു.1പല ഉയർന്ന സസ്യങ്ങളും സൂക്ഷ്മാണുക്കളും ലാക്കേസ് സ്രവിക്കുന്നു,2ഡ്യൂറ്ററോമൈസെറ്റുകൾ, അസ്കോമൈസെറ്റുകൾ, ബേസിഡിയോമൈസെറ്റുകൾ തുടങ്ങിയ ഫംഗസുകൾക്കും ലാക്കേസ് ഉത്പാദിപ്പിക്കാൻ കഴിയും.3മൂന്ന് വ്യത്യസ്ത ചെമ്പ് ആറ്റങ്ങൾ അടങ്ങിയ ഒരു സിസ്റ്റം ഉപയോഗിച്ച് തന്മാത്രാ ഓക്സിജനെ വെള്ളമാക്കി മാറ്റുന്ന ഒരു നീല ഓക്സിഡേസാണ് ലാക്കേസ് (EC 1.10.3.2), അതുവഴി വിവിധ ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങളെയും ആരോമാറ്റിക് അമിനുകളെയും ഓക്സിഡൈസ് ചെയ്യുന്നു. പഴങ്ങളുടെയും പച്ചക്കറികളുടെയും ജ്യൂസുകളുടെ ഉത്പാദന സമയത്ത്, എൻസൈമാറ്റിക്, നോൺ-എൻസൈമാറ്റിക് ബ്രൗണിംഗ് നിർണായക പ്രശ്നങ്ങളാണ്.4ഈ പദാർത്ഥങ്ങൾ ജ്യൂസിന്റെ നിറം, രുചി, സുഗന്ധം എന്നിവയെ പ്രതികൂലമായി ബാധിക്കുന്നതിനാൽ, അവ നീക്കം ചെയ്യണം.5
എല്ലാ പഴങ്ങളിലും, ലോകമെമ്പാടും യൂറോപ്യൻ യൂണിയനിലും ഏറ്റവും കൂടുതൽ ഉപഭോഗം ആപ്പിളാണ്. 2019 ൽ, ആപ്പിൾ ഉത്പാദനം ആഗോളതലത്തിൽ മൂന്നാം സ്ഥാനത്താണ്, 87 ദശലക്ഷം ടൺ കവിഞ്ഞു.6ആപ്പിളിൽ ഫ്ലേവനോയ്ഡുകൾ, കഫീക് ആസിഡ്, ക്ലോറോജെനിക് ആസിഡ് തുടങ്ങിയ ഫിനോളിക് ആസിഡുകൾ ഉൾപ്പെടെ നിരവധി ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങൾ അടങ്ങിയിട്ടുണ്ട്.7ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് സാധാരണയായി വ്യക്തമായ രൂപത്തിലാണ് കഴിക്കുന്നത് എന്നതിനാൽ, ഫിൽട്ടറേഷൻ പ്രക്രിയയിൽ ഏകദേശം 50% മുതൽ 90% വരെ ഫിനോളിക് ഘടകങ്ങൾ നഷ്ടപ്പെടും.8ഇന്ന്, ഉപഭോക്താക്കൾ ഉയർന്ന പോളിഫെനോൾ ഉള്ളടക്കമുള്ള ക്ലൗഡി ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് പോലുള്ള കുറഞ്ഞ അളവിൽ സംസ്കരിച്ച ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുക്കാൻ പ്രവണത കാണിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, ഉയർന്ന ഫിനോളിക് ഉള്ളടക്കം കാരണം, ഇത്തരത്തിലുള്ള ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് പ്രത്യേകിച്ച് നിറവ്യത്യാസത്തിനും കറുപ്പിനും സാധ്യതയുണ്ട്.9ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ കറുപ്പ് നിറം കുറയ്ക്കുന്നതിനോ തടയുന്നതിനോ 60–90°C-ൽ പാസ്ചറൈസേഷൻ പോലുള്ള ഹീറ്റ് ട്രീറ്റ്മെന്റ് രീതികൾ ഉൾപ്പെടെയുള്ള വിവിധ സാങ്കേതികവിദ്യകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു.10എന്നിരുന്നാലും, Sauceda-Gálvez നടത്തിയ ഗവേഷണ പ്രകാരം11, താപ സംസ്കരണം ബാഷ്പശീലമായ രാസവസ്തുക്കളെ നശിപ്പിക്കുകയും ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ ഓർഗാനോലെപ്റ്റിക് ഗുണങ്ങളെ ബാധിക്കുകയും ചെയ്യും. താപ സംസ്കരണ രീതികൾക്കുള്ള ബദലുകളിൽ സൂപ്പർക്രിട്ടിക്കൽ കാർബൺ ഡൈ ഓക്സൈഡ്, അൾട്രാവയലറ്റ് വികിരണം, അൾട്രാസൗണ്ട്, ഉയർന്ന ഹൈഡ്രോസ്റ്റാറ്റിക് മർദ്ദം അല്ലെങ്കിൽ ഉയർന്ന മർദ്ദത്തിലുള്ള ഏകീകൃതവൽക്കരണം എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു.12ഈ സാങ്കേതികവിദ്യകളുടെ കാര്യക്ഷമതയും അനുയോജ്യമായ പഴച്ചാറുകളുടെ വിളവും ഉപയോഗിക്കുന്ന പാരാമീറ്ററുകളെയും ഉൽപ്പന്ന സവിശേഷതകളെയും ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു. ഉയർന്ന വില, ചില ഭക്ഷ്യ ഉൽപന്നങ്ങളുടെ ഗുണനിലവാരത്തിലുള്ള പ്രതികൂല ഫലങ്ങൾ, അല്ലെങ്കിൽ എൻസൈം നിർജ്ജീവമാക്കൽ എന്നിവയുടെ അപര്യാപ്തത എന്നിവയാൽ അവയുടെ വ്യാപകമായ ഉപയോഗം പരിമിതപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്നു.13,14, 13,14, 13,14, 13,
പഴച്ചാറിന്റെ സ്ഥിരതയ്ക്കും വ്യക്തതയ്ക്കും ലാക്കേസ് ഉപയോഗിക്കാം.15ഗോക്മെൻ തുടങ്ങിയവർ.16പഴച്ചാറിന്റെ വ്യക്തതയ്ക്കായി ലാക്കേസ് ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു, കാരണം ഇത് ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങളെ പോളിമറുകളോ ഒലിഗോമറുകളോ ആക്കി ഫലപ്രദമായി നീക്കംചെയ്യുന്നു, ഇത് ഏത് അൾട്രാഫിൽട്രേഷൻ മെംബ്രണും എളുപ്പത്തിൽ നീക്കം ചെയ്യാവുന്നതാണ്, ഇത് ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന് 50°C താപനിലയിൽ ആറ് ആഴ്ച വരെ സ്ഥിരമായ നിറവും വ്യക്തതയും നിലനിർത്താൻ അനുവദിക്കുന്നു. ശുദ്ധീകരിച്ച *ട്രൈക്കോഡെർമ* ലാക്കേസ് അലുമിന ബീഡുകളിൽ നിശ്ചലമാക്കി, ആപ്പിൾ ജ്യൂസിലെ സൂക്ഷ്മജീവികളുടെ മലിനീകരണം മൂലമുണ്ടാകുന്ന രുചിയില്ലാത്ത സംയുക്തങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുത്ത് നീക്കം ചെയ്യാൻ ഉപയോഗിച്ചു.17
ആപ്പിൾ ജ്യൂസിലെ ബാഷ്പശീല ഘടകങ്ങളിൽ ഏകദേശം 80-90% എസ്റ്ററുകളും ആൽഡിഹൈഡുകളുമാണ്, ഇത് ജ്യൂസിന് ഒരു പ്രത്യേക സുഗന്ധം നൽകുന്നു.18ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന് വ്യക്തത നൽകുന്നതിനായി, തേങ്ങാ ചിരട്ടയിൽ നിന്നുള്ള പ്രകൃതിദത്ത നാരുകൾ കൊണ്ട് നിർമ്മിച്ച വിലകുറഞ്ഞ ഒരു സപ്പോർട്ടിൽ *ട്രാമെറ്റസ് വെർസികളറിൽ* നിന്നുള്ള ലാക്കേസ് നിശ്ചലമാക്കി.19എൻസൈം-ഫ്രീ അല്ലെങ്കിൽ ഇമ്മൊബിലൈസേഷൻ രീതികൾ ഉപയോഗിച്ചോ അല്ലെങ്കിൽ അൾട്രാഫിൽട്രേഷനുമായി സംയോജിപ്പിച്ചോ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ (നിറവും ടർബിഡിറ്റിയും) സ്ഥിരത മുൻ പഠനങ്ങൾ അന്വേഷിച്ചിട്ടുണ്ട്.5,19,എന്നിരുന്നാലും, സംഭരണ സമയത്ത് ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ ഭൗതിക രാസ ഗുണങ്ങളിൽ ഫംഗസ് ലാക്കേസുകളുടെ സ്വാധീനം വ്യക്തമല്ല. അതിനാൽ, ഫംഗസ് ലാക്കേസുകൾ ഉപയോഗിച്ചുള്ള ചികിത്സയ്ക്കും രണ്ടാഴ്ചത്തെ റഫ്രിജറേറ്റഡ് സംഭരണത്തിനും ശേഷം ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ ഭൗതിക രാസ ഗുണങ്ങൾ, ഫിനോളിക് സംയുക്ത ഉള്ളടക്കം, ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനം എന്നിവയിലെ മാറ്റങ്ങൾ പരീക്ഷണാത്മകമായി അന്വേഷിക്കുക എന്നതായിരുന്നു ഈ പഠനത്തിന്റെ ലക്ഷ്യം. ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങളെ ഓക്സിഡൈസ് ചെയ്യാനുള്ള കഴിവ് ലാക്കേസുകൾക്കുണ്ട്, ഇത് ജ്യൂസ് ക്ലാരിഫിക്കേഷൻ ഉൾപ്പെടെയുള്ള വിവിധ വ്യാവസായിക പ്രക്രിയകളിൽ ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് അവ വാഗ്ദാനമാകുന്നു. *പ്ലൂറോട്ടസ് ഓസ്ട്രിയറ്റസ്* NRC 620 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസുകൾ ഈ പഠനം പരിശോധിച്ചു, ജ്യൂസ് ക്ലാരിഫിക്കേഷനിലെ അവയുടെ പ്രവർത്തനത്തിനും ഫലപ്രാപ്തിക്കും അനുയോജ്യമായ സാഹചര്യങ്ങളിൽ ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിച്ചു. മുത്തുച്ചിപ്പി കൂണുകളെക്കുറിച്ചുള്ള ഗവേഷണം (P. ostreatus NRC 620) ഇപ്പോഴും പരിമിതമാണെങ്കിലും, മുൻ പഠനങ്ങൾ Trametes versicolor, Ganoderma lucidum പോലുള്ള വിവിധ ഫംഗസ് സ്രോതസ്സുകളിൽ നിന്നുള്ള എൻസൈമുകൾ പരിശോധിച്ചിട്ടുണ്ട്. ഭക്ഷ്യ വ്യവസായത്തിൽ ഈ എൻസൈമിന്റെ സാധ്യതയുള്ള പ്രയോഗത്തെ വിലയിരുത്തുകയും അതിന്റെ അതുല്യമായ ഗുണങ്ങൾ, പ്രത്യേകിച്ച് അതിന്റെ അനുയോജ്യമായ pH, താപനില എന്നിവ എടുത്തുകാണിക്കുകയും ചെയ്യുക എന്നതായിരുന്നു ഈ പഠനത്തിന്റെ ലക്ഷ്യം.
2,2′-അസൂക്സിബിസ്(3-എഥൈൽബെൻസോത്തിയാസോലിൻ-6-സൾഫോണിക് ആസിഡ്) (ABTS) സിഗ്മ-ആൽഡ്രിച്ചിൽ (കാനഡ) നിന്ന് വാങ്ങി. മറ്റെല്ലാ റിയാജന്റുകളും അനലിറ്റിക്കൽ ഗ്രേഡിലുള്ളവയായിരുന്നു.
നാഷണൽ റിസർച്ച് സെന്ററിന്റെ മൈക്രോബയൽ കൾച്ചർ കളക്ഷൻ സെന്ററിൽ നിന്ന് അറിയപ്പെടുന്ന മുത്തുച്ചിപ്പി കൂൺ സ്ട്രെയിൻ NRC620 ലഭിച്ചു. ഉപകൃഷിക്ക് ശേഷം, ഈ സ്ട്രെയിൻ ഉരുളക്കിഴങ്ങ് ഡെക്സ്ട്രോസ് അഗർ സ്ലാന്റുകളിൽ 4°C താപനിലയിൽ സൂക്ഷിച്ചു. ഇനോക്കുലം തയ്യാറാക്കൽ രീതി ഇപ്രകാരമായിരുന്നു: 10 ദിവസം പ്രായമായ, പൂർണ്ണമായും വികസിപ്പിച്ച മൈസീലിയം ഉരുളക്കിഴങ്ങ് ഡെക്സ്ട്രോസ് അഗർ പ്ലേറ്റുകളിൽ കുത്തിവയ്ക്കുകയും 28°C താപനിലയിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. 10 ദിവസത്തിനുശേഷം, അണുവിമുക്തമായ ലോഹ പഞ്ച് ഉപയോഗിച്ച് അഗർ മീഡിയയിൽ നിന്ന് 12-മില്ലീമീറ്റർ വ്യാസമുള്ള മൂന്ന് മൈസീലിയൽ ബ്ലോക്കുകൾ നീക്കം ചെയ്യുകയും 50 മില്ലി അണുവിമുക്തമാക്കിയ കൾച്ചർ മീഡിയം (pH 5.0, ഒത്മാൻ തുടങ്ങിയവർ മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ) അടങ്ങിയ കോട്ടൺ പ്ലഗുകളുള്ള 250-മില്ലി എൽ എർലെൻമെയർ ഫ്ലാസ്കുകളിൽ സ്ഥാപിക്കുകയും ചെയ്തു.20). കൾച്ചറുകൾ 28°C താപനിലയിൽ 18 ദിവസത്തേക്ക് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. തുടർന്ന് കൾച്ചറുകൾ വാട്ട്മാൻ നമ്പർ 1 ഫിൽറ്റർ പേപ്പർ വഴി ഫിൽട്ടർ ചെയ്തു, തത്ഫലമായുണ്ടാകുന്ന സൂപ്പർനേറ്റന്റ് എൻസൈം സ്രോതസ്സായി വർത്തിച്ചു.
ABTS ഒരു സബ്സ്ട്രേറ്റ് ആയി ഉപയോഗിച്ചാണ് ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനം നിർണ്ണയിച്ചത്. പ്രതിപ്രവർത്തന മിശ്രിതത്തിൽ (2 mL) 500 μL 0.3 mM ABTS (0.1 M സോഡിയം സിട്രേറ്റ് ബഫറിൽ ലയിപ്പിച്ചത്, pH 4.5), ആവശ്യമായ അളവിൽ എൻസൈം സാമ്പിൾ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളത്തിൽ ലയിപ്പിച്ചത് എന്നിവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.21,22മുറിയിലെ താപനിലയിൽ (28 °C ± 2) ലാക്കേസിന് ABTS ഓക്സിഡൈസ് ചെയ്യാൻ കഴിയുമെന്ന് കണക്കിലെടുക്കുമ്പോൾ, 420 nm (ε) ൽ ആഗിരണം വർദ്ധിക്കുന്നത് അളന്നാണ് ABTS ഓക്സിഡേഷൻ നിർണ്ണയിച്ചത്.420 (420)= 36,000 സെ.മീ-1 M -1) ഒരു എജിലന്റ് കാരി-100 യുവി സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ ഉപയോഗിച്ച്. മിനിറ്റിൽ 1 μmol ABTS ഓക്സിഡൈസ് ചെയ്യുന്നതിന് ഒരു യൂണിറ്റ് ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനം ആവശ്യമായിരുന്നു. ബോവിൻ സെറം ആൽബുമിൻ ആന്തരിക നിയന്ത്രണമായി ഉപയോഗിച്ച് ബ്രാഡ്ഫോർഡ് രീതി ഉപയോഗിച്ചാണ് പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത നിർണ്ണയിച്ചത്.23,24, 23, 4, 23, 24, 24, 24, 25, 25, 25, 26, 27, 24, 24, 25, 26, 27, 24, 24, 25, 27, 24, 24, 25, 27, 24, 24, 25, 27, 24, 24, 25, 25, 26, 27, 27, 28, 29, 24, 23, 24, 24, 24, 24, 25, 25, 26, 27, 24, 24, 25, 27, 24, 24, 25, 27, 24, 25, 27, 24, 25, 27, 24, 25, 27, 28, 25, 27, 28, 29, 24, 23, 24, 24, 24, 24, 25, 25, 27, 24, 25, 27, 24, 25, 27, 24, 25, 27, 27, 28, 24, 25, 27, 28, 28, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29, 29,
NRC 620 എന്ന മുത്തുച്ചിപ്പി കൂൺ വർഗ്ഗത്തിൽ നിന്ന് എൻസൈം ലഭിച്ച ശേഷം, 28°C താപനിലയിൽ സ്ഥിരമായ സാഹചര്യങ്ങളിൽ 25 ദിവസത്തേക്ക് വ്യത്യസ്ത കൃഷി ഇടവേളകളിൽ അതിന്റെ പ്രവർത്തനം അളന്നു.
ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനത്തിൽ താപനിലയുടെ സ്വാധീനം പഠിക്കുന്നതിനായി, 20 മുതൽ 90 °C വരെയുള്ള താപനില പരിധിയിൽ പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്തി. എൻസൈം ചേർത്ത് പ്രതിപ്രവർത്തനം ആരംഭിക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, ബഫറും (0.1 M സോഡിയം സിട്രേറ്റ്, pH 4.5) സബ്സ്ട്രേറ്റും (ABTS) കലർത്തി വിവിധ താപനിലകളിൽ 5 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. 0.05 M സോഡിയം ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫറിൽ (pH 7.0) യഥാക്രമം 40, 50, 60, 70 °C താപനിലയിൽ 2 മണിക്കൂർ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തുകൊണ്ട് എൻസൈമിന്റെ താപ സ്ഥിരത വിലയിരുത്തി. തുടർന്ന് ABTS സബ്സ്ട്രേറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് ശേഷിക്കുന്ന പ്രവർത്തനം വിലയിരുത്തി.
2.5 മുതൽ 7.0 വരെയുള്ള pH പരിധിയിലുള്ള 0.1 M സിട്രേറ്റ്-ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫറുകളിൽ ABTS ഒരു സബ്സ്ട്രേറ്റായി ഉപയോഗിച്ചാണ് ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനത്തിൽ pH ന്റെ സ്വാധീനം വിലയിരുത്തിയത്. pH സ്ഥിരത വിലയിരുത്തുന്നതിനായി എൻസൈം ലായനി 40°C താപനിലയിൽ 0.1 M സിട്രേറ്റിലും ട്രിസ് ബഫറുകളിലും (pH 3, 4, 6, 7) രണ്ട് മണിക്കൂർ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. ABTS ഒരു സബ്സ്ട്രേറ്റായി ഉപയോഗിച്ചുള്ള ശേഷിക്കുന്ന പ്രവർത്തനം ഇൻകുബേഷനുശേഷം കണക്കാക്കി.
വിവിധ ലോഹ അയോണുകൾ (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, Mn2+) അടങ്ങിയ സോഡിയം ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫറിൽ (0.05 M, pH 7.0) യഥാക്രമം 2.5 mM, 10 mM സാന്ദ്രതയിൽ ലാക്കേസ് 10 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. തുടർന്ന് പ്രതിപ്രവർത്തനം ആരംഭിക്കുന്നതിനായി സബ്സ്ട്രേറ്റ് (ABTS) ചേർക്കുകയും ആപേക്ഷിക പ്രവർത്തനം വിലയിരുത്തുകയും ചെയ്തു.
വിവിധ സാന്ദ്രതകളിൽ (0.025–3 mM) ലാക്കേസ് ഉപയോഗിച്ചുള്ള ABTS ഓക്സീകരണം pH 4.5 ൽ അളന്നു, ചലനാത്മക പാരാമീറ്ററുകൾ (Vmax ഉം Km ഉം) നിർണ്ണയിക്കാൻ.സ്ഥിരാങ്കങ്ങൾമൈക്കിളിസ്-മെന്റൻ സമവാക്യത്തിന്റെ ലൈൻവീവർ-ബർക്ക് പ്ലോട്ട് ഉപയോഗിച്ചാണ് കണക്കാക്കിയത്, ഇത് സബ്സ്ട്രേറ്റ് സാന്ദ്രതയുടെ ഒരു ഫംഗ്ഷനായി പ്രതിപ്രവർത്തന നിരക്കിന്റെ പരസ്പരബന്ധം പ്ലോട്ട് ചെയ്യുന്നു. ഗ്രാഫ്പാഡ് പ്രിസം പതിപ്പ് 6.01 സോഫ്റ്റ്വെയർ ഉപയോഗിച്ച് ലൈൻവീവർ-ബർക്ക് പ്ലോട്ടിൽ നിന്നാണ് ചലനാത്മക സ്ഥിരാങ്കങ്ങൾ കണക്കാക്കിയത്.
ആപ്പിൾ ടാപ്പ് വെള്ളത്തിൽ നന്നായി കഴുകിയ ശേഷം, അവയെ പകുതിയായി മുറിച്ച് പൂർണ്ണമായും ഓട്ടോമാറ്റിക് ബ്രൗൺ MP80 ആപ്പിൾ ജ്യൂസർ (ജർമ്മനിയിൽ നിർമ്മിച്ചത്) ഉപയോഗിച്ച് ജ്യൂസ് പിഴിഞ്ഞെടുത്തു. ജ്യൂസ് നാല് പാളികളായ ചീസ്ക്ലോത്തിലൂടെ ഫിൽട്ടർ ചെയ്തു. നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പിലേക്ക് എൻസൈമുകളൊന്നും ചേർത്തില്ല, അതേസമയം 2.0% ലാക്കേസ് (പരീക്ഷിച്ച ഏറ്റവും ഫലപ്രദമായ സാന്ദ്രത) പുതുതായി തയ്യാറാക്കിയ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിൽ ചേർത്തു, തുടർന്ന് അത് 4°C-ൽ രണ്ടാഴ്ചത്തേക്ക് സൂക്ഷിച്ചു.
ബൗൾട്ടൺ എറ്റ് രീതി അനുസരിച്ച് ടൈട്രേറ്റബിൾ അസിഡിറ്റി (TA), pH എന്നിവ നിർണ്ണയിച്ചു.അൽ.27. ഓരോ സാമ്പിളിന്റെയും pH ഒരു ഡിജിറ്റൽ pH മീറ്റർ (JENWAY 3510 pH മീറ്റർ) ഉപയോഗിച്ചാണ് അളന്നത്. താഴെ പറയുന്ന ഫോർമുല ഉപയോഗിച്ച് മാലിക് ആസിഡിനെ അടിസ്ഥാനമാക്കി ടൈട്രേറ്റബിൾ അസിഡിറ്റി (TA) കണക്കാക്കി.
ഇവിടെ V ഉം C ഉം യഥാക്രമം ടൈറ്ററേഷനിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന സോഡിയം ഹൈഡ്രോക്സൈഡ് ലായനിയുടെ വ്യാപ്തവും (mL) സാന്ദ്രതയും (0.1 mol/L) ആണ്. K എന്നത് 0.067 ന് തുല്യമായ മാലിക് ആസിഡ് പരിവർത്തന ഗുണകമാണ്, W എന്നത് ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ പിണ്ഡം (g) ആണ്.
ആകെ ലയിക്കുന്ന ഖരപദാർത്ഥങ്ങൾ (ടിഡിഎസ്) എല്ലാ ജ്യൂസുകളുടെയും ഉള്ളടക്കം ഒരു PAL-1 പോക്കറ്റ് റിഫ്രാക്ടോമീറ്റർ (ATAGO, ടോക്കിയോ, ജപ്പാൻ) ഉപയോഗിച്ചാണ് നിർണ്ണയിച്ചത്. ഓരോ അളവെടുപ്പിനും ശേഷം, ഒപ്റ്റിക്കൽ ലെൻസ് ഡീയോണൈസ് ചെയ്ത വെള്ളത്തിൽ കഴുകി, ഓരോ ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് സാമ്പിളും മൂന്ന് തവണ പരിശോധിച്ചു. മൂന്ന് അളവുകളുടെയും ശരാശരി കണക്കാക്കിയാണ് ഓരോ സാമ്പിളിന്റെയും മൂല്യം കണക്കാക്കിയത്. ഈ ഫലങ്ങൾ ശരാശരി കണക്കാക്കിയാണ് ഓരോ ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് സാമ്പിളിന്റെയും ശരാശരി ± സ്റ്റാൻഡേർഡ് ഡീവിയേഷനും കണക്കാക്കിയത്.
ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് സാമ്പിളുകളുടെ വിസ്കോ ഇലാസ്തികത ഒരു റൊട്ടേഷണൽ വിസ്കോമീറ്റർ (RV, Rheotest 2, ജർമ്മനി) ഉപയോഗിച്ച് വിലയിരുത്തി. വിസ്കോമീറ്ററിന്റെ “S2″ സിലിണ്ടറിനുള്ളിലാണ് സാമ്പിൾ സ്ഥാപിച്ചത്. ഷിയർ സ്ട്രെസ് വക്രവുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുമ്പോൾ ഷിയർ റേറ്റ് കർവിന്റെ ചരിവ് പ്രത്യക്ഷ വിസ്കോസിറ്റിയെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു, ഇത് ഷിയർ സ്ട്രെസിൽ നിന്നും അനുബന്ധ വളവുകളിൽ നിന്നും വിവിധ ഷിയർ നിരക്കുകളിൽ (1.00 മുതൽ 437.4 s⁻¹ വരെ) കണക്കാക്കി. പ്രത്യക്ഷ വിസ്കോസിറ്റി കണക്കാക്കുന്നതിനുള്ള ഫോർമുല ഇപ്രകാരമാണ്:
ഇവിടെ η എന്നത് പ്രത്യക്ഷ വിസ്കോസിറ്റി (cP), τ എന്നത് ഷിയർ സ്ട്രെസ് (dyn/cm²), γ എന്നത് ഷിയർ റേറ്റ് (sec⁻¹), കൂടാതെ (τ) ഇനിപ്പറയുന്ന ഫോർമുല ഉപയോഗിച്ച് ടോർക്ക് (α), സിലിണ്ടർ (Z) മൂല്യങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് കണക്കാക്കുന്നു: τ = Z. α.
മെയ്ഡാവെറ്റിന്റെ രീതി അനുസരിച്ചാണ് ബ്രൗണിംഗ് സൂചിക നിർണ്ണയിച്ചത്അൽ.29. 10 മില്ലി ജ്യൂസ് സാമ്പിൾ 2750 xg ൽ 10 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്തു. 5 മില്ലി ജ്യൂസ് സൂപ്പർനേറ്റന്റ് 5 മില്ലി 95% എത്തനോളുമായി കലർത്തി. ഷിമാഡ്സു യുവി സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ (UV-1601 PC) ഉപയോഗിച്ച് മിശ്രിതത്തിന്റെ ആഗിരണം 420 nm ൽ അളന്നു.
ബൗൾട്ടൺ തുടങ്ങിയവർ വിവരിച്ചതുപോലെ, ഫോളിൻ-സിയോകാൽറ്റിയു റിയാജന്റ് ഉപയോഗിച്ച് കളർമെട്രിക് രീതിയിലാണ് മൊത്തം ഫിനോളിക് ഉള്ളടക്കം (TPC) നിർണ്ണയിച്ചത്.[27]]. 0 മുതൽ 500 mg/L വരെയുള്ള സാന്ദ്രതകൾക്കായി ഗാലിക് ആസിഡിന്റെ ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് വക്രം നിർമ്മിച്ചു (ആർ²= 0.997). ഫലങ്ങൾ ഗാലിക് ആസിഡിന് തുല്യമായി (mg GAE/mL) പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു.
25 μL ആപ്പിൾ ജ്യൂസിൽ 125 μL ഡിസ്റ്റിൽഡ് വെള്ളവും 2850 μL FRAP ലായനിയും ചേർത്ത് മിശ്രിതം ഇരുണ്ട സ്ഥലത്ത് വയ്ക്കുക.30മിനിറ്റ്. പിന്നെ ഷിമാഡ്സു യുവി സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ (UV-1601 PC) ഉപയോഗിച്ച് 593 nm-ൽ ആഗിരണം അളക്കുക. 300 mM അസറ്റേറ്റ് ബഫർ (pH 3.6), 20 mM ഇരുമ്പ് (III) ക്ലോറൈഡ്, 10 mM 2,4,6-ട്രിസ് (2-പിരിഡൈൽ) ട്രയാസൈൻ (TPTZ) (40 mM HCl-ൽ ലയിപ്പിച്ചത്) എന്നിവ 10:1:1 എന്ന അനുപാതത്തിൽ കലർത്തിയാണ് FRAP റീജന്റ് തയ്യാറാക്കിയത്. ട്രോലോക്സ് സ്റ്റാൻഡേർഡായി ഉപയോഗിച്ച് ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് സൃഷ്ടിച്ചു (ആർ²= 0.999), ഫലങ്ങൾ μM ട്രോലോക്സ്/mL ആയി പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു.
ഡിപിപിഎച്ച് ഫ്രീ റാഡിക്കലുകളെ തുരത്താനുള്ള കഴിവ് വിലയിരുത്തുന്നതിനായി ഡിപിപിഎച്ച് രീതി ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ചതും ചികിത്സിക്കാത്തതുമായ ജ്യൂസുകളുടെ ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനം നിർണ്ണയിച്ചു.31പത്ത് മൈക്രോലിറ്റർ ജ്യൂസ് 1 മില്ലി DPPH ലായനിയിൽ (100 μM) മെഥനോളിൽ കലർത്തി. 30 മിനിറ്റ് ഇരുട്ടിൽ പ്രതിപ്രവർത്തിച്ച ശേഷം, ഷിമാഡ്സു UV സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ (UV-1601 PC) ഉപയോഗിച്ച് മിശ്രിതത്തിന്റെ ആഗിരണം 517 nm ൽ അളന്നു. ഒരു കാലിബ്രേഷൻ വക്രത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കി ഫലങ്ങൾ ട്രോലോക്സ് തുല്യമായി (μM ട്രോലോക്സ്/മില്ലി) പ്രകടിപ്പിച്ചു (R2= 0.990).
ലഭിച്ച ഡാറ്റ കാണിക്കുന്നത്, അഴുകലിന്റെ 18-ാം ദിവസത്തിന്റെ അവസാനത്തോടെ NRC 620 മുത്തുച്ചിപ്പി കൂണുകളിൽ പരമാവധി ലാക്കേസ് ഉൽപ്പാദനം നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു, ഇത് 1302 U/L പ്രവർത്തനത്തിലെത്തി. ലാക്കേസ് ഉൽപ്പാദനത്തിനുള്ള ഏറ്റവും അനുയോജ്യമായ കൃഷി സമയം നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള അടിസ്ഥാനമായി ഇത് പ്രവർത്തിച്ചു (ചിത്രം 1). കൃഷി സമയം കൂടുന്നതിനനുസരിച്ച് എൻസൈം ഉൽപ്പാദനം വർദ്ധിച്ചെങ്കിലും, വർദ്ധനവിന്റെ നിരക്ക് കൃഷി സമയത്തിന് നേരിട്ട് ആനുപാതികമായിരുന്നില്ല; 21 ദിവസത്തിനുശേഷം, എൻസൈം പ്രവർത്തനം 90 U/L മാത്രം വർദ്ധിച്ചു (1390 U/L ആയി). അതിനാൽ, വർദ്ധിച്ച കൃഷി സമയത്തിന്റെ സാമ്പത്തിക നേട്ടങ്ങളുമായി ഉൽപ്പന്ന വിളവ് സന്തുലിതമാക്കുന്നതിന് 18 ദിവസത്തെ ഒപ്റ്റിമൽ കൃഷി സമയമായി ഒടുവിൽ തിരഞ്ഞെടുത്തു.
പ്ലൂറോട്ടസ് ഓസ്ട്രിയറ്റസ് NRC 620 ലെ ലാക്കേസ് വിളവിൽ കൃഷി സമയത്തിന്റെ സ്വാധീനം. മൂന്ന് (12 മില്ലീമീറ്റർ) ഫംഗസ് മൈസീലിയൽ ബ്ലോക്കുകൾ 50 മില്ലി സ്റ്റെറൈൽ മീഡിയത്തിൽ കുത്തിവച്ച ശേഷം വ്യത്യസ്ത സമയങ്ങളിൽ 28 °C ൽ കൃഷി ചെയ്തു.
മറ്റ് പഠനങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്ന ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, ഫംഗസുകളിൽ ലാക്കേസ് സ്രവണം പരമാവധി കൈവരിക്കുന്നതിന് അനുയോജ്യമായ സംസ്ക്കരണ കാലയളവ് 7 നും 36 നും ഇടയിലായിരിക്കുമെന്നാണ്.32എസികെ തുടങ്ങിയവർ പറയുന്നതനുസരിച്ച്.33, *ട്രാമെറ്റസ് പോളിസോണ* WRF03 അഴുകലിന്റെ ഒമ്പതാം ദിവസത്തിന്റെ അവസാനത്തോടെ ഏറ്റവും കൂടുതൽ ലാക്കേസ് ഉത്പാദിപ്പിച്ചു, 1637 U/mg പ്രോട്ടീന്റെ പ്രത്യേക പ്രവർത്തനം ഉണ്ടായിരുന്നു. കൂടാതെ, ഒത്മാൻ തുടങ്ങിയവർ.34*ട്രൈക്കോഡെർമ ഹാർസിയാനം* S7113 കൃഷിയുടെ അഞ്ചാം ദിവസം വലിയ അളവിൽ ലാക്കേസ് സ്രവിക്കുന്നതായി കണ്ടെത്തി. പതിനാലാം ദിവസം ലാക്കേസ് ഉൽപാദന നിരക്ക് ഏറ്റവും ഉയർന്ന പ്രവർത്തനത്തിലെത്തി, പിന്നീട് ക്രമേണ കുറഞ്ഞു.34പ്രധാന വളർച്ചാ ഘട്ടത്തിലും എൻസൈം സ്രവണം സംഭവിക്കാമെങ്കിലും, സാധാരണയായി ഇത് ഇന്റർമീഡിയറ്റ് ഘട്ടത്തിൽ ഉച്ചസ്ഥായിയിലെത്തുകയും കാർബൺ അല്ലെങ്കിൽ നൈട്രജൻ സ്രോതസ്സിന്റെ ഉപഭോഗം മൂലമാണ് ഇത് സംഭവിക്കുന്നത്.34,35
പ്ലൂറോട്ടസ് ഓസ്ട്രിയറ്റസ് NRC 620 ലെ ലാക്കേസ് 50°C മുതൽ 80°C വരെയുള്ള വിശാലമായ താപനില പരിധിയിൽ ഉയർന്ന പ്രവർത്തനം പ്രകടിപ്പിച്ചെങ്കിലും, പീക്ക് പ്രവർത്തനത്തോട് അടുക്കുമ്പോൾ (69–98%), അതിന്റെ പരമാവധി പ്രവർത്തനം 70°C ൽ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു (ചിത്രം 2a). ഈ താപനില പരിധിക്ക് പുറത്ത്, എൻസൈം പ്രവർത്തനം ഏകദേശം 70°C ൽ കുറഞ്ഞു. ഉയർന്ന താപനിലയിൽ എൻസൈം സജീവമാണെന്ന് ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, ഉയർന്ന താപനില പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിന്റെ ഗതികോർജ്ജം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനാലാകാം.
*പ്ലൂറോട്ടസ് ഓസ്ട്രിയറ്റസ്* NRC 620 ലെ ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനത്തിൽ പ്രതിപ്രവർത്തന താപനില (a) യും pH (b) യും ചെലുത്തുന്ന സ്വാധീനം. എൻസൈം ചേർത്ത് പ്രതിപ്രവർത്തനം ആരംഭിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് 5 മിനിറ്റ് വ്യത്യസ്ത താപനിലകളിൽ മിശ്രിതം മുൻകൂട്ടി ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്താണ് 20 മുതൽ 90 °C വരെയുള്ള താപനില നേടിയത്. 2.5 മുതൽ 7.0 വരെയുള്ള pH പരിധിയിൽ 0.1 M സിട്രേറ്റ്-ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫർ അടങ്ങിയ ലായനികളിൽ ഒരു സബ്സ്ട്രേറ്റായി ABTS ഉപയോഗിച്ച് ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനത്തിൽ pH ന്റെ സ്വാധീനം വിലയിരുത്തി.
എസികെ എറ്റ് പ്രകാരംഅൽ.33*ട്രാമെറ്റസ് പോളിസോണ* WRF03 ലാക്കേസിന് ഏറ്റവും അനുയോജ്യമായ താപനില 55 °C ആണ്, ഇത് *ഗാനോഡെർമ ലൂസിഡത്തിന്* തുല്യമാണ്.ലാക്കേസ്36*ട്രാമെറ്റസ് പോളിസോണ* KU-RNW02737 ന് അനുയോജ്യമായ താപനില (50 °C) ന് സമാനമാണ്.ലാക്കേസ് . ബാൽഡ്രിയൻ38മറ്റ് ലിഗ്നിൻ-ഡീഗ്രേഡിംഗ് എൻസൈം സിസ്റ്റങ്ങളെ സംബന്ധിച്ചിടത്തോളം, ലാക്കേസിന് അനുയോജ്യമായ താപനില പരിധി 50 നും 70 °C നും ഇടയിലാണെന്ന് കുറിക്കുന്നു.
ഫലങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് എൻസൈം pH 3.0 ൽ ഏറ്റവും ഉയർന്ന പ്രവർത്തനം പ്രകടിപ്പിക്കുകയും pH 3.5 ൽ 94% പ്രവർത്തനം കൈവരിക്കുകയും ചെയ്തു എന്നാണ്. എന്നിരുന്നാലും, 2.5 മുതൽ 7.0 വരെയുള്ള വിശാലമായ pH ശ്രേണിയിൽ ഇത് സജീവമായി തുടർന്നു (ചിത്രം 2b). കൂടാതെ, ന്യൂട്രൽ അല്ലെങ്കിൽ ആൽക്കലൈൻ അവസ്ഥകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ അസിഡിറ്റി ഉള്ള സാഹചര്യങ്ങളിൽ ഇത് ഉയർന്ന പ്രവർത്തനം പ്രകടമാക്കി. 2.5 മുതൽ 4.5 വരെയുള്ള pH ശ്രേണിയിൽ ഇതിന്റെ പ്രവർത്തനം കുറഞ്ഞത് 77% എങ്കിലും തുടർന്നു, പക്ഷേ pH 7.0 ൽ ഏകദേശം 38% മാത്രമേ എത്തിയുള്ളൂ. *Trametes polyzona* WRF03 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസിനുള്ള ഒപ്റ്റിമൽ pH 4.533 ആയിരുന്നു, ഇത് *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, *Trametes hirsuta* 41 എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസുകളുടെ pH ന് തുല്യമാണ്. എന്നിരുന്നാലും, ചെയറിൻ തുടങ്ങിയവർ നടത്തിയ പഠനമനുസരിച്ച്.42*Polymorpha f. sp.* WR710-1 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസിന് ഏറ്റവും അനുയോജ്യമായ pH 2.2 ആണ്, അതേസമയം *Polymorpha f. sp.* IBL-04 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസിന് ഏറ്റവും അനുയോജ്യമായ pH 5.043 ആണ്. T2/T3 ലാക്കേസിന്റെ കോപ്പർ ആറ്റങ്ങളുമായി ഹൈഡ്രോക്സൈഡ് അയോണുകൾ (ലാക്കേസ് ഇൻഹിബിറ്റർ) ബന്ധിപ്പിക്കുന്നത് ന്യൂട്രൽ അല്ലെങ്കിൽ ആൽക്കലൈൻ pH സാഹചര്യങ്ങളിൽ ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനം കുറയുന്നതിന് കാരണമാകാം. ഇത് T1 കേന്ദ്രത്തിൽ നിന്ന് T2/T3 കേന്ദ്രത്തിലേക്കുള്ള ആന്തരിക ഇലക്ട്രോൺ കൈമാറ്റത്തെ തടസ്സപ്പെടുത്തിയേക്കാം, അതുവഴിപരിമിതപ്പെടുത്തൽഎൻസൈം പ്രവർത്തനം23,44
വ്യത്യസ്ത താപനിലകളിൽ എൻസൈമിനെ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുന്നതിലൂടെ, ഇൻകുബേഷൻ സമയവും താപനിലയും എൻസൈമിന്റെ സ്ഥിരതയെ ബാധിക്കുന്നതായി കണ്ടെത്തി. ശ്രദ്ധേയമായി, *ട്രാമെറ്റസ് പോളിസോണ* NRC 620-ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസ് 40°C, 50°C എന്നിവയിൽ ഉയർന്ന സ്ഥിരത കാണിച്ചു, 120 മിനിറ്റിനുശേഷം യഥാക്രമം 68.33% ഉം 59.61% ഉം പ്രാരംഭ പ്രവർത്തനം നിലനിർത്തി (ചിത്രം 3a). ഇതിനു വിപരീതമായി, അതേ സാഹചര്യങ്ങളിൽ (40°C, 50°C, 120 മിനിറ്റ്), *ട്രാമെറ്റസ് പോളിസോണ* WRF03-ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസ് യഥാക്രമം 64.38% ഉം 42.92% ഉം പ്രവർത്തനം നിലനിർത്തി.33നേരെമറിച്ച്, ഇൻകുബേഷൻ സമയവും താപനിലയും വർദ്ധിക്കുന്നത് *ട്രാമെറ്റസ് പോളിസോണ* NRC 620 ലാക്കേസിന്റെ സ്ഥിരത കുറച്ചു; 60 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലും 70 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലും 60 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്ത ശേഷം, അതിന്റെ പ്രവർത്തനം യഥാക്രമം 39.24% ഉം 1.72% ഉം ആയി കുറഞ്ഞു (ചിത്രം 3a). പരീക്ഷണ ഫലങ്ങൾക്ക് അനുസൃതമായി, *ട്രാമെറ്റസ് പോളിസോണ* WRF03 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസ് താപ ചികിത്സാ പ്രക്രിയയിലുടനീളം 40 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലും 50 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലും ഉയർന്ന സ്ഥിരത കാണിച്ചു.33അതുപോലെ, ലുവാങ്ജാരോൻകിറ്റ് തുടങ്ങിയവർഅൽ.37ചെയറിൻ തുടങ്ങിയവർഅൽ.42ട്രമെറ്റെസ് പോളിസോണ KURNW027, ട്രമെറ്റെസ് പോളിസോണ WR710-1 എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസുകളുടെ 50 °C താപനിലയിൽ യഥാക്രമം 1 മണിക്കൂർ സ്ഥിരത റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു. വിവിധ ബയോടെക്നോളജിക്കൽ മേഖലകളിൽ ബാധകമായ ഒരു ഉപയോഗപ്രദമായ ബയോകാറ്റലിസ്റ്റ് എന്ന നിലയിൽ, വിശാലമായ താപനില പരിധിയിൽ ലാക്കേസിന് നല്ല സ്ഥിരതയും പ്രകടനവും ഉണ്ടായിരിക്കണം.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസിന്റെ തെർമോസ്റ്റാറ്റിക് സ്ഥിരത (a) ഉം pH സ്ഥിരത (b) ഉം. 0.05 M സോഡിയം ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫറിൽ (pH 7.0) 40, 50, 60, 70 °C താപനിലയിൽ യഥാക്രമം 2 മണിക്കൂർ എൻസൈം ലായനി ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തുകൊണ്ട് തെർമോസ്റ്റാറ്റിക് സ്ഥിരത വിലയിരുത്തി. 0.1 M സിട്രേറ്റ് ബഫറിലും ട്രിസ് ബഫറിൽ (pH 3, 4, 6, 7) 40 °C താപനിലയിൽ 2 മണിക്കൂർ എൻസൈം ലായനി ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തുകൊണ്ട് pH സ്ഥിരത വിലയിരുത്തി. ഇൻകുബേഷനുശേഷം ABTS ഒരു അടിവസ്ത്രമായി ഉപയോഗിച്ച് ശേഷിക്കുന്ന പ്രവർത്തനം കണക്കാക്കി.
എൻസൈം ഉപയോഗത്തിനും സംഭരണത്തിനുമുള്ള ഒപ്റ്റിമൽ സാഹചര്യങ്ങൾ നിർണ്ണയിക്കാൻ, ലാക്കേസ് സ്ഥിരതയിൽ pH ന്റെ സ്വാധീനം ഞങ്ങൾ അന്വേഷിച്ചു. വ്യത്യസ്ത pH മൂല്യങ്ങളിലേക്കുള്ള എക്സ്പോഷർ പ്രോട്ടീൻ ഘടനയുടെ സ്ഥിരതയെ സാരമായി ബാധിച്ചു, അതുവഴി എൻസൈം തന്മാത്രയുടെ സ്ഥിരതയെയും പ്രവർത്തനത്തെയും സ്വാധീനിച്ചു. അസിഡിക് സാഹചര്യങ്ങളിൽ എൻസൈം സ്ഥിരത കുറവാണെന്ന് ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചു, അതേസമയം ഉയർന്ന pH മൂല്യങ്ങളിൽ (ന്യൂട്രൽ, ആൽക്കലൈൻ മേഖലകൾ) മികച്ച സ്ഥിരത പ്രകടമാക്കി. 7.0, 6.0, 4.0, 3.0 എന്നീ pH മൂല്യങ്ങളിൽ, 120 മിനിറ്റിനു ശേഷമുള്ള എൻസൈം നിലനിർത്തൽ നിരക്കുകൾ യഥാക്രമം ഏകദേശം 100%, 62.54%, 52.39%, 11.14% എന്നിങ്ങനെയായിരുന്നു (ചിത്രം 3b). *സ്ട്രോംബസ് മൾട്ടിസസ്* WRF03 ലാക്കേസ് ന്യൂട്രൽ pH മൂല്യങ്ങളിൽ (5.5–6.5) ഉയർന്ന സ്ഥിരതയും അസിഡിക് pH മൂല്യങ്ങളിൽ (4.0 ന് താഴെ) കുറഞ്ഞ സ്ഥിരതയും കാണിച്ചു. 5.5, 6.0, 6.5 എന്നീ pH മൂല്യങ്ങളിൽ 120 മിനിറ്റിനുശേഷം, എൻസൈം നിലനിർത്തൽ നിരക്ക് യഥാക്രമം ഏകദേശം 82%, 100%, 93% ആയിരുന്നു.33ഖൈറിൻ തുടങ്ങിയവർ.42ട്രമെറ്റെസ് പോളിസോണ WR710-1 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസ് 6.0 മുതൽ 7.0 വരെയുള്ള pH ശ്രേണിയിൽ സ്ഥിരതയുള്ളതാണെന്ന് സയീദ് തുടങ്ങിയവർ അഭിപ്രായപ്പെട്ടു.45ന്യൂട്രൽ pH സാഹചര്യങ്ങളിൽ ലാക്കേസ് കൂടുതൽ സ്ഥിരതയുള്ളതാണെന്ന് കാണിച്ചു. എന്നിരുന്നാലും, സെറീന യൂണികോളറിൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസ് ക്ഷാര സാഹചര്യങ്ങളിൽ സ്ഥിരത പ്രകടിപ്പിച്ചു (pH 9.0)46. പഠിച്ച ലാക്കേസുകൾ വിശാലമായ pH ശ്രേണിയിൽ ഉയർന്ന സ്ഥിരത കാണിച്ചു. വ്യാവസായിക ആപ്ലിക്കേഷനുകൾക്ക് ഇത് ഒരു പ്രധാന സ്വഭാവമായിരിക്കാം.
ചില ലോഹ അയോണുകൾക്ക് എൻസൈം പ്രവർത്തനത്തിൽ ഉത്തേജകവും തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നതുമായ ഫലങ്ങൾ ഉള്ളതിനാൽ, വ്യാവസായിക പ്രയോഗങ്ങളിൽ എൻസൈം പ്രവർത്തനത്തിൽ അവയുടെ സ്വാധീനം പരിഗണിക്കേണ്ടതുണ്ട്. ബാഹ്യകോശ എൻസൈമുകളുടെ സ്ഥിരതയെയും സമന്വയത്തെയും ബാധിക്കുന്ന സാധാരണ പാരിസ്ഥിതിക മലിനീകരണമായതിനാൽ ഇത് നിർണായകമാണ്.47*Pleurotus ostreatus* NRC 620 ൽ നിന്നുള്ള ഒന്നിലധികം ലോഹ അയോണുകൾ ലാക്കേസിൽ ചെലുത്തുന്ന സ്വാധീനം അന്വേഷിക്കുന്നതിന്, ഞങ്ങൾ അനുബന്ധ പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്തി. ചിത്രം 4 ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, ഉപയോഗിക്കുന്ന ലോഹത്തിന്റെ തരം അനുസരിച്ച്, ലോഹ അയോണുകളുടെ സാന്ദ്രത 2.5 mM ൽ നിന്ന് 10 mM ആയി വർദ്ധിക്കുന്നത് എൻസൈം പ്രവർത്തനത്തെ പ്രതികൂലമായി ബാധിച്ചു. ഉദാഹരണത്തിന്,മില്ലിഗ്രാം⁺ , കോ²⁺ , സിൽവർ⁺, കൂടാതെക്യൂ²⁺എൻസൈം പ്രവർത്തനത്തെ ഉത്തേജിപ്പിക്കാനും സജീവമാക്കാനും കഴിയും, അതേസമയംന⁺ , മാസം⁺ , കാ²⁺, കൂടാതെകെ⁺എൻസൈം പ്രവർത്തനത്തെ തടയാൻ കഴിയും. 10 mM സാന്ദ്രതയിൽ, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനത്തിന്റെ ഏറ്റവും ശക്തമായ ആക്റ്റിവേറ്ററുകളാണ് Cu²⁺, Mg²⁺ അയോണുകൾ, ഇത് യഥാക്രമം ഏകദേശം 34% ഉം 20% ഉം ആക്റ്റിവേഷൻ ഡിഗ്രി നൽകുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, 10 mM സാന്ദ്രതയിൽ, Ca²⁺ അയോണുകൾ ലാക്കേസിന്റെ ഏറ്റവും ശക്തമായ ഇൻഹിബിറ്ററായിരുന്നു, ഇത് എൻസൈം പ്രവർത്തനം ഏകദേശം 60% കുറയ്ക്കുന്നു.
പ്ലൂറോട്ടസ് ഓസ്ട്രിയറ്റസ് NRC 620 ലാക്കേസിന്റെ പ്രവർത്തനത്തിൽ ലോഹ അയോണുകളുടെ സ്വാധീനം. 2.5 mM ഉം 10 mM ഉം സാന്ദ്രതയിൽ വിവിധ ലോഹ അയോണുകൾ അടങ്ങിയ സോഡിയം ഫോസ്ഫേറ്റ് ബഫറിൽ (0.05 M, pH 7.0) ലാക്കേസ് 10 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. തുടർന്ന് സബ്സ്ട്രേറ്റ് (ABTS) ചേർത്താണ് പ്രതികരണം ആരംഭിച്ചത്, അതിനുശേഷം ആപേക്ഷിക പ്രവർത്തനം അളന്നു.
*ട്രമെറ്റസ് പോളിസോണ* WRF03³ യുടെ പ്രവർത്തനം Mg²⁺ ഉം Cu²⁺ ഉം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് കണ്ടെത്തിയ മറ്റ് രചയിതാക്കളുടെ ഫലങ്ങളുമായി ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ പൊരുത്തപ്പെടുന്നു. *സൈലാരിയ* sp. യിൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസ് ഒരു പരിധിവരെ ചെമ്പ് അയോണുകൾ (Cu²⁺) ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് കാസ്റ്റാനോ തുടങ്ങിയവർ കണ്ടെത്തി. കൂടാതെ, *പാരകോണിയോതൈറിയം വേരിയബിൾ*, *ട്രാമെറ്റസ് പ്യൂബെസെൻസ്* എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസുകളെക്കുറിച്ച് ഫോറൗട്ടാൻഫാർ തുടങ്ങിയവർ സമാനമായ പഠനങ്ങൾ നടത്തി. ഈ എൻസൈമിന്റെ ടൈപ്പ് II കോപ്പർ-ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റ് (T2) ഒരു നിശ്ചിത സാന്ദ്രതയിൽ Cu²⁺ ഉപയോഗിച്ച് പൂരിതമാക്കാൻ കഴിയും, ഇത് ഉയർന്ന Cu²⁺³⁹ സാന്ദ്രതയിൽ ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനത്തിന്റെ ഉത്തേജനത്തെ വിശദീകരിച്ചേക്കാം. വൈറ്റ് റോട്ട് ഫംഗസ് ലാക്കേസുകൾ ഒന്നിലധികം കോപ്പർ ആറ്റങ്ങൾ അടങ്ങിയ ഓക്സിഡേസുകൾ ആയതിനാൽ, ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനത്തിൽ കോപ്പർ അയോണുകളുടെ ഫലങ്ങൾ വൈവിധ്യപൂർണ്ണമാണ്, അവ ഉത്തേജകവും തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നതും മുതൽ നിഷ്പക്ഷവുമാണ്.⁵¹ ഇതിനു വിപരീതമായി, ഷൗ തുടങ്ങിയവർ. [52] [52]റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തുക്യൂ²⁺തായ്വാൻ ഭൂഗർഭ ചിതലിന്റെ (ഓഡോണ്ടോടെർമെസ് ഫോർമോസാനസ്) ലാക്കേസ് പ്രവർത്തനത്തെ തടഞ്ഞു. എന്നിരുന്നാലും, സെറീന sp. HYB07 ന്റെ ലാക്കേസുകൾ[53]ക്ലിറ്റോസൈബ് മാക്സിമയും[54]ചെമ്പ് അയോണുകൾ ബാധിച്ചില്ല.
അടിവസ്ത്രത്തിന്റെ പ്രത്യേകതയെ അതിന്റെ ചലനാത്മക പാരാമീറ്ററുകൾ (Km, Vmax) പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു; എൻസൈമുമായുള്ള അടിവസ്ത്രത്തിന്റെ ബന്ധനം ശക്തമാകുമ്പോൾ, Km മൂല്യം കുറയുകയും അടിവസ്ത്രത്തിന്റെ പ്രത്യേകത വർദ്ധിക്കുകയും ചെയ്യും.3,21,55*Pleurotus ostreatus* NRC 620 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസിന്റെ ചലനാത്മക പാരാമീറ്ററുകൾ (Km ഉം Vmax ഉം) ഗ്രാഫ്പാഡ് പ്രിസം 6.0 സോഫ്റ്റ്വെയർ ഉപയോഗിച്ച് ലൈൻവീവർ-ബർക്ക് പ്ലോട്ട് പ്ലോട്ട് ചെയ്തുകൊണ്ട് നിർണ്ണയിച്ചു (ചിത്രം 5). ABTS ഒരു സബ്സ്ട്രേറ്റായി ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, ഫലങ്ങൾ 1.99 mM ഉം 16217 μmol ഉം ആയിരുന്നു.മിനിറ്റ്⁻¹ എൽ⁻¹,യഥാക്രമം. എൽസയെദ് തുടങ്ങിയവർ.21ABTS ഓക്സിഡേഷനുള്ള Km മൂല്യങ്ങൾ യഥാക്രമം 0.1 mM ഉം 0.064 mM ഉം ആണെന്ന് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു, ഇത് ABTS-നുള്ള Lac A, Lac B ഐസോഎൻസൈമുകളുടെ ഉയർന്ന അടുപ്പം സൂചിപ്പിക്കുന്നു. കൂടാതെ, Vmax മൂല്യങ്ങൾ 0.182 μmol ആയിരുന്നു.മിനിറ്റ്⁻¹0.603 μmol ഉംമിനിറ്റ്⁻¹യഥാക്രമം. ലഭിച്ച Km മൂല്യം Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM) നേക്കാൾ കുറവായിരുന്നു; കൂടാതെ, അവയുടെ Vmax മൂല്യവും (1429 mmol min⁻¹) ആയിരുന്നു.താഴ്ന്നത്ABTS ഒരു സബ്സ്ട്രേറ്റായി ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ.33 അതുപോലെ, ലെന്റിനസ് സ്ക്വറോസുലസ് MR13, ട്രാമെറ്റ്സ് sp. AH28-2 ലാക്കേസ് സാന്ദ്രത എന്നിവയുടെ Km മൂല്യങ്ങൾ യഥാക്രമം 0.0714 mM ഉം 0.025 mM ഉം ആയിരുന്നു, കൂടാതെ Vmax മൂല്യങ്ങൾ 0.0091 mM min−1 ഉം 0.67 mM min−1 mg−1 ഉം ആയിരുന്നു (ABTS നെ അപേക്ഷിച്ച്), യഥാക്രമം.56,57
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസിന്റെ പ്രവർത്തനത്തിൽ ABTS സാന്ദ്രതയുടെ സ്വാധീനം അന്വേഷിച്ചു, പ്രാരംഭ പ്രതിപ്രവർത്തന പ്രവേഗത്തിന്റെയും ABTS സാന്ദ്രതയുടെയും പരസ്പരബന്ധിതമായ ഒരു ലൈൻവീവർ-ബർക്ക് പ്ലോട്ട് പ്ലോട്ട് ചെയ്തു. വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രതകളുള്ള (0.025–3.0 mM) ലാക്കേസിന്റെ ഓക്സിഡേഷൻ പ്രതിപ്രവർത്തനം pH 4.5 ൽ അളന്നു, ചലനാത്മക പാരാമീറ്ററുകൾ (Vmax ഉം Km ഉം) നിർണ്ണയിക്കാൻ. മൈക്കിളിസ്-മെന്റൻ ചലനാത്മക സ്ഥിരാങ്കങ്ങൾ പ്രതിപ്രവർത്തന പ്രവേഗത്തിന്റെയും സബ്സ്ട്രേറ്റ് സാന്ദ്രതയുടെയും പരസ്പരബന്ധിതമായ ലൈൻവീവർ-ബർക്ക് പ്ലോട്ട് ഉപയോഗിച്ചാണ് കണക്കാക്കിയത്. ഗ്രാഫ്പാഡ് പ്രിസം 6.01 സോഫ്റ്റ്വെയർ ഉപയോഗിച്ച് ലൈൻവീവർ-ബർക്ക് പ്ലോട്ടിൽ നിന്നാണ് ചലനാത്മക സ്ഥിരാങ്കങ്ങൾ കണക്കാക്കിയത്.
പെക്റ്റിനേസുകൾ പോലുള്ള പരമ്പരാഗത ക്ലാരിഫയിംഗ് എൻസൈമുകൾ പെക്റ്റിക് പദാർത്ഥങ്ങളെ ഹൈഡ്രോലൈസ് ചെയ്യുന്നു, ഇത് വിസ്കോസിറ്റിയും ടർബിഡിറ്റിയും കുറയ്ക്കുന്നു. അവ ഘടനാപരമായ പോളിസാക്രറൈഡുകളെ ഫലപ്രദമായി തകർക്കുന്നു, കൂടാതെ വിളവും വ്യക്തതയും മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിന് സെല്ലുലേസുകൾ, ഹെമിസെല്ലുലേസുകൾ പോലുള്ള മറ്റ് എൻസൈമുകളുമായി സംയോജിച്ച് പലപ്പോഴും ഉപയോഗിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, പെക്റ്റിനേസുകൾ ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങളെ പ്രത്യേകമായി ലക്ഷ്യമിടുന്നില്ല, കാരണം ഇവയാണ് ടർബിഡിറ്റിക്കും ഓക്സിഡേറ്റീവ് ബ്രൗണിംഗിനും പ്രധാന കാരണമാകുന്നത്, പ്രത്യേകിച്ച് ആപ്പിൾ, മുന്തിരി ജ്യൂസ് പോലുള്ള ജ്യൂസുകളിൽ.58ഇതിനു വിപരീതമായി, ലാക്കേസുകൾ ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങളുടെ ഓക്സീകരണത്തെ ഉത്തേജിപ്പിക്കുകയും അവയെ വലുതും ലയിക്കാത്തതുമായ തന്മാത്രകളാക്കി പോളിമറൈസ് ചെയ്യുകയും അവശിഷ്ടം അല്ലെങ്കിൽ ഫിൽട്രേഷൻ വഴി നീക്കം ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു. ഈ സംവിധാനം വ്യക്തത മെച്ചപ്പെടുത്തുക മാത്രമല്ല, ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങൾ മൂലമുണ്ടാകുന്ന ഓക്സിഡേറ്റീവ് ബ്രൗണിംഗിന്റെ സാധ്യത കുറയ്ക്കുന്നതിലൂടെ ജ്യൂസിന്റെ ഷെൽഫ് ആയുസ്സ് വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. കൂടാതെ, ലാക്കേസ് അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ക്ലാരിഫിക്കേഷൻ പ്രക്രിയകൾ നേരിയ പ്രോസസ്സിംഗ് സാഹചര്യങ്ങളിൽ (pH 3.5–5.5, താപനില 25–40 °C) നടത്താം, ഇത് സൂക്ഷ്മമായ ജ്യൂസുകൾക്ക് അവയുടെ പോഷക അല്ലെങ്കിൽ ഓർഗാനോലെപ്റ്റിക് ഗുണങ്ങളിൽ വിട്ടുവീഴ്ച ചെയ്യാതെ അനുയോജ്യമാക്കുന്നു.59പെക്റ്റിനേസ് ചികിത്സയ്ക്ക് 1-2 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ ജ്യൂസിനെ വ്യക്തമാക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്, അതേസമയം ലാക്കേസ് ചികിത്സയ്ക്ക് സാധാരണയായി ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങൾ പൂർണ്ണമായും കുറയ്ക്കുന്നതിന് കൂടുതൽ പ്രതികരണ സമയം (3-6 മണിക്കൂർ) ആവശ്യമാണ്. എന്നിരുന്നാലും, എൻസൈമിനെ നിശ്ചലമാക്കുന്നതിലൂടെയോ അല്ലെങ്കിൽ ലാക്കേസിനെ മെക്കാനിക്കൽ ക്ലാരിഫിക്കേഷൻ രീതികളുമായി സംയോജിപ്പിച്ചോ ഈ പ്രക്രിയ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യാൻ കഴിയും.60ഈ പഠനത്തിൽ, അസംസ്കൃത സത്തിൽ നിന്നുള്ള എൻസൈം പ്രൊഫൈലിംഗ് ലാക്കേസ്, α-അമൈലേസ് പ്രവർത്തനങ്ങൾ ഗണ്യമായി വെളിപ്പെടുത്തി, അതേസമയം പെക്റ്റിനേസ്, സൈലാനേസ് പ്രവർത്തനങ്ങൾ വളരെ കുറവായിരുന്നു, സെല്ലുലേസ് പ്രവർത്തനം കണ്ടെത്തിയില്ല. അതിനാൽ, ടർബിഡിറ്റിയിലും ഫിനോളിക് ഉള്ളടക്കത്തിലും കുറവുണ്ടായത് പ്രധാനമായും ലാക്കേസിന്റെ പ്രവർത്തനത്താലാണ്, അതേസമയം വിസ്കോസിറ്റിയിലെ മാറ്റം ഭാഗികമായി അമൈലേസിന്റെ പ്രവർത്തനം മൂലമാകാം.
പുതുതായി പിഴിഞ്ഞ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെയും ലാക്കേസ് സംസ്കരിച്ച സാമ്പിളുകളുടെയും ഭൗതിക രാസ പാരാമീറ്ററുകൾ പട്ടിക 1 കാണിക്കുന്നു. പുതുതായി പിഴിഞ്ഞ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ (71.59%) വിളവ് ലാക്കേസ് സംസ്കരിച്ച സാമ്പിളുകളേക്കാൾ (87.34%) കുറവാണെന്ന് ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചു. ഈ ഫലങ്ങൾ പിൽനിക്കിന്റെയും ഓറഞ്ചിന്റെയും കണ്ടെത്തലുകളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.61പഴ സംസ്കരണത്തിൽ എൻസൈമുകളുടെ ഉപയോഗം ജ്യൂസ് വിളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കാനും, ഫിൽട്ടറേഷൻ മെച്ചപ്പെടുത്താനും, സാന്ദ്രതയ്ക്കായി ഉയർന്ന നിലവാരമുള്ളതും തെളിഞ്ഞതുമായ ജ്യൂസ് ലഭിക്കാനും സഹായിക്കുമെന്ന് ആരാണ് സൂചിപ്പിച്ചത്. ജ്യൂസ് വിളവ് വർദ്ധിക്കുന്നത് പ്രധാനമായും ജ്യൂസിലെ ലയിക്കുന്ന പഞ്ചസാരയുടെ അളവിലുള്ള വർദ്ധനവാണ്. പഴങ്ങളുടെ എൻസൈമാറ്റിക് ജലവിശ്ലേഷണ സമയത്ത്, ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ കോശഭിത്തികളിലെ മെസോഗ്ലിയയും പെക്റ്റിനും നശിപ്പിക്കപ്പെടുകയും ന്യൂട്രൽ പഞ്ചസാര, ആസിഡുകൾ പോലുള്ള ലയിക്കുന്ന വസ്തുക്കളായി പരിവർത്തനം ചെയ്യപ്പെടുകയും ചെയ്യുന്നു.62. अनिवालालालालाला. 62. अनिवालഎൻസൈം ഉപയോഗിച്ച ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ pH മൂല്യം നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പിനേക്കാൾ (P < 0.05) വളരെ കുറവായിരുന്നു, സംഭരണ സമയത്ത് രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകളുടെയും pH മൂല്യം ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു (പട്ടിക 1). ഈ ഫലങ്ങൾ മാർക്ക് തുടങ്ങിയവരുടെ ഫലങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.63, ചൂട് ചികിത്സയ്ക്ക് ശേഷം സംഭരണത്തിന് ശേഷം കശുവണ്ടി പഴച്ചാറിന്റെ pH കുറയുന്നതായി അദ്ദേഹം അഭിപ്രായപ്പെട്ടു. എൻസൈം ചികിത്സയ്ക്ക് ശേഷം പെക്റ്റിൻ ഡീഗ്രഡേഷനും ഗാലക്ചുറോണിക് ആസിഡ് രൂപീകരണവും സംഭരണ സമയത്ത് pH വർദ്ധിക്കുന്നതിന് കാരണമായേക്കാം. എൻസൈം ചികിത്സിച്ച സാമ്പിളുകളുടെ pH സംഭരണത്തിലുടനീളം 4.05 നും 4.31 നും ഇടയിലായിരുന്നു, അതേസമയം സംസ്കരിക്കാത്ത ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ pH 4.12 നും 4.33 നും ഇടയിലായിരുന്നു.
സംസ്കരിക്കാത്തതും ലാക്കേസ് ഉപയോഗിച്ചതുമായ സാമ്പിളുകളുടെ ആകെ അസിഡിറ്റി (TA) സംഭരണ സമയം കൂടുന്നതിനനുസരിച്ച് കുറയുന്ന പ്രവണത കാണിച്ചു (പട്ടിക 1). ജൈവ ആസിഡുകൾ കാർബോഹൈഡ്രേറ്റുകളോ എൻസൈമാറ്റിക് പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങളോ ആയി പരിവർത്തനം ചെയ്യപ്പെടുന്നതും ജ്യൂസ് സംഭരണ സമയത്ത് ഓക്സീകരണം സംഭവിക്കുന്നതും അസിഡിറ്റി കുറയാൻ കാരണമായി.64നിയന്ത്രണ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെയും എൻസൈം ഉപയോഗിച്ചുള്ള സാമ്പിളുകളുടെയും ആകെ അസിഡിറ്റി മറ്റ് ജ്യൂസുകളേക്കാൾ (സ്ട്രോബെറി ജ്യൂസ് 0.9%, പ്ലം ജ്യൂസ് 2.2%, കുംക്വാട്ട് ജ്യൂസ് 1.0%, ആപ്രിക്കോട്ട് ജ്യൂസ് 2.4%, ഓറഞ്ച് ജ്യൂസ് 0.8%) കുറവായിരുന്നു, എന്നാൽ മറ്റ് ജ്യൂസുകളുടേതിന് സമാനമാണ് (ഉദാ: പിയർ ജ്യൂസ് 0.3%).62വളരുന്ന സാഹചര്യങ്ങൾ, ജനിതക ഘടകങ്ങൾ, പക്വതയുടെ അളവ്, സംസ്കരണ രീതികൾ തുടങ്ങിയ വിവിധ ഘടകങ്ങൾ കാരണം സംസ്കരിക്കാത്ത പുതുതായി പിഴിഞ്ഞ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിലെ ഈ വ്യത്യാസങ്ങൾ ഉണ്ടാകാം.65നിയന്ത്രണത്തിന്റെയും ലാക്കേസ് ഉപയോഗിച്ചുള്ള ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെയും മൊത്തം അസിഡിറ്റിയിലെ കുറവ് സിംഗ് തുടങ്ങിയവർ അവതരിപ്പിച്ച ഫലങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.6674 ദിവസത്തെ സംഭരണത്തിനു ശേഷം ജിൻ നുവോ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ മൊത്തം അസിഡിറ്റി കുറയുന്നത് സംബന്ധിച്ച്. മറുവശത്ത്, ഓഷ്മിയാൻസ്കിയും വോജ്ഡിലോയും67പരമ്പരാഗത ക്ലാരിഫിക്കേഷൻ രീതികളുടെ ഫലത്തെക്കുറിച്ച് പഠിച്ചപ്പോൾ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ അസിഡിറ്റിയിൽ കാര്യമായ മാറ്റങ്ങളൊന്നും കണ്ടെത്തിയില്ല.
ലാക്കേസ് ഉപയോഗിച്ച് സംസ്കരിച്ച ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ മൊത്തം ലയിക്കുന്ന ഖരപദാർത്ഥങ്ങളുടെ (TSS) മൂല്യം, സംസ്കരിച്ചിട്ടില്ലാത്ത സാമ്പിളിനേക്കാൾ കൂടുതലാണെന്ന് പട്ടിക 1-ൽ അവതരിപ്പിച്ച ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഈ ഫലങ്ങൾ പ്രസിദ്ധീകരിച്ച പഠനങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.68.കൂടാതെ, പട്ടിക 1 കാണിക്കുന്നത് നിയന്ത്രണ ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് ഗ്രൂപ്പിന്റെ TSS മൂല്യം പ്രാരംഭ സമയത്ത് 9.58 ആയിരുന്നുവെന്നും സംഭരണ കാലയളവ് അവസാനിക്കുമ്പോൾ 11.05 ൽ എത്തിയെന്നും ആണ്. ഹമീദ് തുടങ്ങിയവർ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്ത പുതിയ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ TSS മൂല്യങ്ങളേക്കാൾ ഈ മൂല്യങ്ങൾ കുറവാണ്.69.(യഥാക്രമം 11.2 ഉം 11.80 ഉം). ലാക്കേസ് ഉപയോഗിച്ച ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് സാമ്പിളുകളുടെ TSS മൂല്യം ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു, 11.23 മുതൽ ആരംഭിച്ച് രണ്ടാഴ്ച 4°C ൽ സൂക്ഷിച്ചതിനുശേഷം 12.93 ൽ എത്തി (പട്ടിക 1). സിട്രസ് പഴങ്ങൾ, നാരങ്ങകൾ, മധുരമുള്ള ഓറഞ്ച് എന്നിവയിലും സംഭരണ സമയത്ത് TSS-ൽ സമാനമായ വർദ്ധനവ് കണ്ടെത്തി. സംഭരണ സമയത്ത് മൊത്തം ലയിക്കുന്ന ഖരപദാർത്ഥങ്ങളുടെ (TSS) വർദ്ധനവ് പോളിസാക്രറൈഡുകൾ (അന്നജം) മോണോസാക്രറൈഡുകളായി (പഞ്ചസാര) ജലവിശ്ലേഷണം ചെയ്യൽ, ജ്യൂസ് നിർജ്ജലീകരണം മൂലമുള്ള സാന്ദ്രതയിലെ വർദ്ധനവ്, ജ്യൂസിലെ പെക്റ്റിന്റെ ലയിക്കുന്ന ഖരപദാർത്ഥങ്ങളുടെ വിഘടനം എന്നിവ മൂലമാകാം. മൊത്തം ലയിക്കുന്ന ഖരപദാർത്ഥങ്ങളുടെ (TSS) വർദ്ധനവ് ലയിക്കുന്ന പഞ്ചസാരകളുടെ വർദ്ധനവ് മൂലമാകാം, ഇത് യഥാക്രമം പെക്റ്റിൻ അല്ലെങ്കിൽ സെല്ലുലോസിനെ പെക്റ്റിൻ അല്ലെങ്കിൽ സെല്ലുലേസ് ലയിക്കുന്ന പഞ്ചസാരകളാക്കി മാറ്റുന്നതിലൂടെയോ അല്ലെങ്കിൽ അന്നജത്തെ പഞ്ചസാരയാക്കി ജലവിശ്ലേഷണം ചെയ്യുന്നതിലൂടെയോ ഉണ്ടാകാം എന്ന് ഹാമെഡ് തുടങ്ങിയവർ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു.69.ലാക്കേസ് സംസ്കരിച്ച ആപ്പിൾ ജ്യൂസ്, സംസ്കരിച്ചിട്ടില്ലാത്ത ജ്യൂസിനെ അപേക്ഷിച്ച് മികച്ച ഒഴുക്കും കുറഞ്ഞ വിസ്കോസിറ്റിയും പ്രകടിപ്പിക്കുന്നതിനാൽ, ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ ഗുണങ്ങളിൽ ലാക്കേസിന്റെ സ്വാധീനം ദൃശ്യപരമായി കാണാൻ കഴിയും. ഈ നിരീക്ഷണം പട്ടിക 1 ൽ രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്; എൻസൈം സംസ്കരിച്ച സാമ്പിളിന്റെ വിസ്കോസിറ്റി 1.87 cP ആയിരുന്നു, അതേസമയം നിയന്ത്രണ സാമ്പിളിന്റെ വിസ്കോസിറ്റി 2.95 cP ആയിരുന്നു. പെക്റ്റിൻ പോലുള്ള പദാർത്ഥങ്ങളുടെ ഉയർന്ന ജലസംഭരണ ശേഷിയും ഒരു സംയോജിത ശൃംഖല ഘടനയുടെ രൂപീകരണവും മൂലമാണ് വിസ്കോസിറ്റിയിലെ ഈ ഗണ്യമായ കുറവ് ഉണ്ടാകുന്നത്.
ഈ പഠനത്തിൽ, സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ ഉപയോഗിച്ച് 420 nm-ൽ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ ആഗിരണം അളക്കുന്നതിലൂടെ, ബ്രൗണിംഗ് സൂചികയിൽ (BI) ലാക്കേസിന്റെ സ്വാധീനം അന്വേഷിച്ചു. ഫലങ്ങൾ പട്ടിക 1-ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. സംഭരണ സമയത്ത്, ചികിത്സിച്ചതും ചികിത്സിക്കാത്തതുമായ ഗ്രൂപ്പുകളിലെ ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ സാമ്പിളുകളുടെ BI ക്രമേണ വർദ്ധിക്കുന്ന പ്രവണത കാണിച്ചു. BI തവിട്ടുനിറത്തിന്റെ അളവ് പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു, കൂടാതെ ഇത്ഒരു പ്രധാനഎൻസൈമാറ്റിക്, നോൺ-എൻസൈമാറ്റിക് ബ്രൗണിംഗ് പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങളുടെ സൂചകം. സംഭരണ സമയത്ത് ആഗിരണം ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു (P < 0.05). സംഭരണത്തിന്റെ അവസാനം,എ420നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പുകളിലും എൻസൈം ചികിത്സിച്ച ഗ്രൂപ്പുകളിലും ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് സാമ്പിളുകളുടെ മൂല്യം യഥാക്രമം 217% ഉം 121% ഉം വർദ്ധിച്ചു (പട്ടിക 1). എൻസൈം ചികിത്സയ്ക്ക് ബ്രൗണിംഗ് ഡിഗ്രി ഫലപ്രദമായി 56% കുറയ്ക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ബെസെറ തുടങ്ങിയവരുടെ ഫലങ്ങൾ.[19] [19]] ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു; ആപ്പിൾ ജ്യൂസിനെ വ്യക്തമാക്കാൻ അവർ ലാക്കേസ്-ഗ്ലൂട്ടറാൾഡിഹൈഡ്-തേങ്ങാ നാരുകൾ ഉപയോഗിച്ചു, ഇത് അതിന്റെ യഥാർത്ഥ നിറം 61% കുറച്ചു.
പഴച്ചാറുകളിലെ പോളിഫെനോളുകൾക്ക് മനുഷ്യശരീരത്തിൽ പോഷകപരവും ചികിത്സാപരവുമായ ഗുണങ്ങൾ ഉണ്ടെങ്കിലും, അവ പ്രോട്ടീനുകളുമായി പ്രതിപ്രവർത്തിച്ച് ജ്യൂസിൽ മേഘാവൃതം, അവശിഷ്ടം അല്ലെങ്കിൽ പ്രക്ഷുബ്ധത എന്നിവ ഉണ്ടാക്കുകയും അതുവഴി ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ രുചിയും സുഗന്ധവും മാറ്റുകയും അതിന്റെ ഷെൽഫ് ആയുസ്സ് കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യും.71പ്ലൂറോട്ടസ് ഓസ്ട്രിയറ്റസ് NRC 620 ൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസ് ഉപയോഗിച്ച് ആപ്പിൾ ജ്യൂസിലെ ഫിനോളിക് സംയുക്തത്തിന്റെ അളവ് സുരക്ഷിതമായി കുറയ്ക്കുക എന്നതായിരുന്നു ഈ പഠനത്തിന്റെ ലക്ഷ്യം. പട്ടിക 1 ൽ അവതരിപ്പിച്ച ഫലങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് ലാക്കേസ് ഉപയോഗിച്ച ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ മൊത്തം ഫിനോളിക് സംയുക്തത്തിന്റെ അളവ് 4 °C ൽ സൂക്ഷിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു എന്നാണ്. കൂടാതെ, പഠിച്ച രണ്ട് സാമ്പിളുകളിലും സംഭരണ സമയത്ത് മൊത്തം ഫിനോളിക് സംയുക്തത്തിന്റെ അളവും കുറഞ്ഞു (പട്ടിക 1). സാൻഡ്രി തുടങ്ങിയവർ നടത്തിയ ഗവേഷണം.72എൻസൈം ഉപയോഗിച്ചുള്ള ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന് അതിന്റെ ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനവും ഫിനോളിക് സംയുക്ത ഉള്ളടക്കവും നിലനിർത്താൻ കഴിയുമെന്ന് കാണിച്ചു. എന്നിരുന്നാലും, ലെറ്റെറ തുടങ്ങിയവരുടെ ഒരു പഠനത്തിന്റെ ഫലങ്ങൾ.73ഓറഞ്ച് ജ്യൂസിൽ ഫംഗസ് ലാക്കേസ് ചേർത്ത് ചികിത്സിക്കുന്നത് അതിലെ ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങളുടെ അളവ് 45% വരെ കുറയ്ക്കുമെന്ന് പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നു.
ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങൾക്ക് ഫ്രീ റാഡിക്കൽ സ്കാവെഞ്ചിംഗ്, സിംഗിൾട്ട് ഓക്സിജൻ റിഡക്ഷൻ ആൻഡ് ക്വഞ്ചിംഗ്, ഹൈഡ്രജൻ ആറ്റം ട്രാൻസ്ഫർ, ഫ്രീ റാഡിക്കലുകളിലേക്കുള്ള ഇലക്ട്രോൺ ദാനം തുടങ്ങിയ ഗുണങ്ങളുണ്ടെന്ന് തെളിയിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്, ഇത് അവയെ ശക്തമായ ആന്റിഓക്സിഡന്റുകളാക്കുന്നു.74അതുകൊണ്ട്, ഈ പഠനത്തിൽ, 14 ദിവസത്തേക്ക് റഫ്രിജറേറ്ററിൽ സൂക്ഷിച്ചിരിക്കുന്ന ആപ്പിൾ ജ്യൂസിന്റെ ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനത്തിൽ ലാക്കേസിന്റെ സ്വാധീനം വിലയിരുത്താൻ DPPH, FRAP അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള രീതികൾ ഉപയോഗിച്ചു (പട്ടിക 2). സംഭരണ സമയത്ത് ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനത്തിൽ വർദ്ധനവ് രണ്ട് രീതികളിലും കാണിച്ചു, ഇത് സ്വതന്ത്ര ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങളുടെ വർദ്ധനവോ മെയിലാർഡ് പ്രതികരണ ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ (MRP) രൂപീകരണമോ കാരണമാകാം, മെയിലാർഡ് പ്രതികരണ ഉൽപ്പന്നങ്ങളായിരിക്കാം ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനത്തിലെ വർദ്ധനവിന് കാരണം.75എൻസൈമാറ്റിക് അല്ലാത്ത തവിട്ടുനിറത്തിലുള്ള പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങൾ (അസ്കോർബിക് ആസിഡ് ഡീഗ്രഡേഷൻ, മെയിലാർഡ് പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങൾ, പഞ്ചസാരയുടെ ആസിഡ്-ഉത്പ്രേരക ഡീഗ്രഡേഷൻ എന്നിവ ഉൾപ്പെടെ) തവിട്ട് പിഗ്മെന്റുകൾ (മെലനോയ്ഡിനുകൾ) ഉത്പാദിപ്പിക്കുന്നു. ഇന്റർമീഡിയറ്റ് അസ്കോർബിക് ആസിഡ് ഡീഗ്രഡേഷൻ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾക്കും പഞ്ചസാര ഡീഗ്രഡേഷൻ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾക്കും (കാർബോണൈൽ സംയുക്തങ്ങൾ പോലുള്ളവ) മെയിലാർഡ് പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങൾ വഴി അമിനോ ആസിഡുകളുമായി പ്രതിപ്രവർത്തിക്കാൻ കഴിയും.76പഴങ്ങളും പച്ചക്കറികളും സൂക്ഷിക്കുമ്പോൾ തവിട്ടുനിറമാകുന്നതിനെക്കുറിച്ച് വിപുലമായി പഠിച്ചിട്ടുണ്ടെങ്കിലും, ഈ പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള നമ്മുടെ ധാരണ പരിമിതമാണ്.77FRAP രീതിയുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ലാക്കേസ് ഉപയോഗിച്ചുള്ള ആപ്പിൾ ജ്യൂസ് DPPH രീതി (പട്ടിക 2) പ്രകാരം ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനം ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞതായി കാണിച്ചു, കൂടാതെ സംഭരണ സമയം വർദ്ധിക്കുന്നതിനനുസരിച്ച് എല്ലാ സാമ്പിളുകളുടെയും ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനം ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു. ഈ പഠനത്തിൽ ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനം നിർണ്ണയിക്കുന്നതിന് രണ്ട് വ്യത്യസ്ത രീതികൾ ഉപയോഗിച്ചു, കാരണം അവയുടെ തത്വങ്ങൾ വ്യത്യസ്തമാണ്. ഫ്രീ റാഡിക്കലുകളെ നിർവീര്യമാക്കാനുള്ള കഴിവ് DPPH രീതി അളക്കുന്നു, അതേസമയം ഇരുമ്പ് അയോണുകൾ കുറയ്ക്കാനുള്ള കഴിവ് FRAP രീതി അളക്കുന്നു. അതിനാൽ, പഠിച്ച സാമ്പിളുകളുടെ ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനം നന്നായി മനസ്സിലാക്കുന്നതിന് ആന്റിഓക്സിഡന്റ് പ്രവർത്തനം നിർണ്ണയിക്കുന്നതിന് ഒന്നിലധികം രീതികൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.78
ഈ പഠനത്തിലെ പ്രധാന കണ്ടെത്തലുകളിൽ ഒന്ന് *Pleurotus ostreatus* laccase NRC 620 70°C ലും pH 3.0 ലും ഒപ്റ്റിമൽ പ്രവർത്തനം കാണിക്കുന്നു എന്നതാണ്. *Trametes versicolor*, *Ganoderma lucidum* laccase എന്നിവ പോലുള്ള ജ്യൂസിന്റെ വ്യക്തതയ്ക്കായി സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന മറ്റ് ഫംഗസ് ലാക്കേസുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, *P. ostreatus* NRC 620 ഉയർന്ന താപ സ്ഥിരതയും കൂടുതൽ അസിഡിറ്റി pH ഉം കാണിക്കുന്നു. *Trametes versicolor*, *Ganoderma lucidum* എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള ലാക്കേസുകൾ സാധാരണയായി 50-60°C പരിധിയിലും 3.5 നും 5.0 നും ഇടയിലുള്ള pH മൂല്യങ്ങളിലും ഒപ്റ്റിമൽ പ്രവർത്തനം കാണിക്കുന്നു. ഈ വ്യത്യാസം മെച്ചപ്പെട്ട ജ്യൂസ് ക്ലാരിറ്റി കാര്യക്ഷമതയ്ക്ക് കാരണമായേക്കാം, പ്രത്യേകിച്ച് താഴ്ന്ന pH മൂല്യങ്ങളിൽ സ്ഥിരത നിർണായകമായ അസിഡിക് ജ്യൂസുകൾക്ക്. *P യുടെ സവിശേഷ സ്വഭാവം. പഠിച്ച മറ്റ് ഫംഗസ് ലാക്കേസുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 കൂടുതൽ വെല്ലുവിളി നിറഞ്ഞ സാഹചര്യങ്ങളിൽ ഫലപ്രദമായി പ്രവർത്തിക്കാനുള്ള കഴിവ് പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു. വ്യാവസായിക പ്രയോഗങ്ങളിൽ വേഗതയേറിയ പ്രതിപ്രവർത്തന നിരക്ക്, കുറഞ്ഞ സൂക്ഷ്മജീവ മലിനീകരണം എന്നിവ പോലുള്ള സാധ്യതയുള്ള ഗുണങ്ങളെ ഇതിന്റെ ഉയർന്ന ഒപ്റ്റിമൽ പ്രവർത്തന താപനില സൂചിപ്പിക്കുന്നു. പല ജ്യൂസുകളുടെയും അസിഡിറ്റി സ്വഭാവത്തിന് അനുയോജ്യമായ ഇതിന്റെ കുറഞ്ഞ pH, ജ്യൂസ് ക്ലാരൈസേഷൻ പ്രക്രിയകളിൽ ഉപയോഗപ്രദമായേക്കാം. ഈ ഫലങ്ങൾ വലിയ തോതിലുള്ള പ്രയോഗത്തിനായി കൂടുതൽ പര്യവേക്ഷണം നടത്തുന്നതിന് ന്യായീകരിക്കുന്നു, ഇത് *പ്ലൂറോട്ടസ് ഓസ്ട്രിയസ്* NRC 620 നെ പരമ്പരാഗത ഫംഗസ് ലാക്കേസ് സ്രോതസ്സുകൾക്ക് ഒരു പ്രായോഗിക ബദലാക്കി മാറ്റുന്നു. മുൻ പഠനങ്ങളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ഒപ്റ്റിമൽ താപനില 60°C ഉം ഒപ്റ്റിമൽ pH 3.0 ഉം ആണെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. 60°C-ൽ 80 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിന് ശേഷം, *ഗാനോഡെർമ ലൂസിഡം* ലാക്കേസ് നിലനിർത്തി.46അതിന്റെ പ്രവർത്തനത്തിന്റെ %.79 കുർണിയാവതിയും നിസെല്ലും അനുസരിച്ച്80*ഗാനോഡെർമ ലൂസിഡം* എൻസൈമുകൾ 25°C യിലും 5.0 മുതൽ 8.0 വരെയുള്ള pH മൂല്യങ്ങളിലും, pH 6.0 ലും 10 മുതൽ 30°C വരെയുള്ള താപനിലയിലും മികച്ചതും മിതമായതുമായ സ്ഥിരത കാണിക്കുന്നു. ഈ പഠനത്തിൽ, *പ്ലൂറോട്ടസ് ഓസ്ട്രിയറ്റസിന്* എൻസൈം പ്രവർത്തനത്തിന് ഏറ്റവും അനുയോജ്യമായ pH ഉം താപനിലയും യഥാക്രമം 3.0 ഉം 70°C ഉം ആണെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. 40°C ലും 50°C ലും രണ്ട് മണിക്കൂർ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്ത ശേഷം, എൻസൈം അതിന്റെ പ്രവർത്തനത്തിന്റെ 68.33% ഉം 59.61% ഉം നിലനിർത്തി. കൂടാതെ, പ്ലൂറോട്ടസ് ഓസ്ട്രിയറ്റസ് NRC 620 ലാക്കേസ് 50°C മുതൽ 80°C വരെയുള്ള വിശാലമായ താപനില പരിധിയിൽ ഉയർന്ന പ്രവർത്തനം പ്രദർശിപ്പിച്ചു, പരമാവധി പ്രവർത്തനത്തിൽ (69%–98%) ഏതാണ്ട് എത്തി, പരമാവധി പ്രവർത്തനം 70°C ൽ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു.
ഉപസംഹാരമായി, സ്റ്റാറ്റിക് സാഹചര്യങ്ങളിൽ ലഭിച്ച മുത്തുച്ചിപ്പി കൂൺ ലാക്കേസ് NRC620, വിവിധ pH, താപനില സാഹചര്യങ്ങളിൽ ഒപ്റ്റിമൽ പ്രവർത്തനവും സ്ഥിരതയും പ്രകടമാക്കി, മറ്റ് എൻസൈം സ്രോതസ്സുകളെ അപേക്ഷിച്ച് മികച്ച സ്ഥിരത പ്രകടമാക്കി. 10 mM MgSO₄ ഉം CuSO₄ ഉം ചേർത്തത് എൻസൈം പ്രവർത്തനം യഥാക്രമം ഏകദേശം 21% ഉം 35% ഉം വർദ്ധിപ്പിച്ചു. ആപ്പിൾ ജ്യൂസിലേക്ക് സംസ്കരിച്ചപ്പോൾ, എൻസൈം pH ഉം വിസ്കോസിറ്റിയും കുറച്ചു, അതേസമയം സംഭരണ സമയത്ത് ഫിനോളിക് ഉള്ളടക്കം അല്പം കുറഞ്ഞു.
ഭക്ഷ്യ വ്യവസായത്തിൽ, പ്രത്യേകിച്ച് പാനീയ ക്ലാരിഫിക്കേഷനിൽ, ലാക്കേസിന്റെ സാധ്യതകൾ ഫലങ്ങൾ സ്ഥിരീകരിക്കുന്നു. ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങളെ പ്രത്യേകമായി വിഘടിപ്പിക്കുന്നതിലൂടെ, ലാക്കേസ് ടർബിഡിറ്റി കുറയ്ക്കുകയും വ്യക്തത മെച്ചപ്പെടുത്തുകയും മാത്രമല്ല, നേരിയ പ്രവർത്തന സാഹചര്യങ്ങളിൽ പഴച്ചാറുകളുടെ ഗുണനിലവാരം നിലനിർത്തുകയും ചെയ്യുന്നു. ജെലാറ്റിൻ, ബെന്റോണൈറ്റ്, സിലിക്ക ജെൽ തുടങ്ങിയ പരമ്പരാഗത ക്ലാരിഫിക്കിംഗ് ഏജന്റുകളിൽ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമായി, ലാക്കേസ് മാലിന്യങ്ങൾ സൃഷ്ടിക്കുകയോ പാനീയങ്ങളിൽ നിന്ന് മനോഹരമായ സുഗന്ധങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്യുകയോ ചെയ്യുന്നില്ല, ഇത് കൂടുതൽ പരിസ്ഥിതി സൗഹൃദവും സുസ്ഥിരവുമായ ഒരു ഓപ്ഷനാക്കി മാറ്റുന്നു. കൂടാതെ, മറ്റ് എൻസൈമുകളുമായും ഫിൽട്ടറേഷൻ രീതികളുമായും താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ഉൽപ്പന്ന ഗുണനിലവാരത്തിൽ വിട്ടുവീഴ്ച ചെയ്യാതെ ലാക്കേസ് ഒരു ലക്ഷ്യബോധമുള്ളതും ചെലവ് കുറഞ്ഞതുമായ പരിഹാരം വാഗ്ദാനം ചെയ്യുന്നു.
ക്യോമുഹിംബോ, എച്ച്ഡി, ബ്രിങ്ക്, എച്ച്ജി. ചെമ്പ് അടങ്ങിയ ലാക്കേസുകളുടെ പ്രയോഗങ്ങളും നിശ്ചലീകരണ തന്ത്രങ്ങളും; ഒരു അവലോകനം. ഹെലിയോൺ 9, e13156 (2023).
പോസ്റ്റ് സമയം: ഡിസംബർ-15-2025